Geleneksel kolon kromatografisi
2.Kromatografik sütun (dönme tipi)
3.Kromatografik Sütun (Manuel)
*** Yukarıda bütün için fiyat listesi, almamızı isteyin
Açıklama
Teknik parametreler
Geleneksel kolon kromatografisiSabit faz ile mobil faz arasındaki farklı maddelerin dağılım oranlarındaki farkı veya madde ayrımı elde etmek için farklı maddelere göre sabit fazların farklı tutma kapasitelerini kullanır. Karışım, mobil faz ile kromatografik kolondan aktığında, kolondaki sabit faz ile etkileşime girecektir (çözünme, adsorpsiyon vb.). Karışımdaki her bir bileşenin fiziksel ve kimyasal özellikleri ve yapılarındaki farklılıklar nedeniyle, sabit faz ile etkileşimlerinin büyüklüğü ve mukavemeti de değişir. Aynı itici kuvvet altında, sabit fazdaki her bir bileşenin tutma süresi farklıdır, böylece karışımdaki bileşenler sütundan belirli bir sırada akar ve ayrılık elde eder.
Parametre
Pestisit Tortu Tespiti
 |
 |
 |
 |
Sık sık bunu söylüyoruzGeleneksel kolon kromatografisiaslında kolon kromatografisi olarak da bilinen kolon kromatografisi ayrımıdır. İlk olarak 1903'te Rus bilim adamları tarafından icat edildi ve kullanıldı. Bir bitki pigmentleri çözeltisini kalsiyum karbonat tozuna ezdi ve kalsiyum karbonat tozu üzerinde yukarıdan aşağıya farklı renk bantları buldu. Farklı renk bantları, nispeten saf klorofil, lutein vb.
Yüz yıllık gelişimden sonra, bu yöntem nispeten olgunlaştı ve sabit faz, tek bir kalsiyum karbonat tozundan alüminaya (asidik, nötr, alkaline bölünebilir), aralarında, silika jelinin en yaygın olarak kullanıldığı, genellikle normal faz silika jel ve ters faz silika jeline bölünmüştür!
Sabit fazın (silika jel) genellikle saflaştırılması ve aktive edilmesi gerekir ve partikül boyutu düzgün olmalıdır. Teoride, parçacık boyutu ne kadar küçük ve birim kütle başına yüzey alanı ne kadar büyük olursa, adsorpsiyon kapasitesi o kadar yüksek olur ve ayırma etkisi o kadar iyi olur.
Bununla birlikte, pratik kullanımda, sabit faz partikülleri çok küçük olduğunda, genellikle iki durum vardır: biri ağırlıkta daha hafif olmaları ve havada kolayca yüzmesidir (silika jel insan vücudu tarafından bozulamaz ve daha ince, o kadar toksiktir); İkinci olarak, küçük parçacıklar ayrıca parçacıklar arasında küçük boşluklara yol açabilir, bu da yavaş bir çözücü akış hızı ve zaman tüketimi ile sonuçlanabilir; Örnek olarak silikon alarak, ticari olarak kullanılan en büyük silikon boyutu şu anda 200-300 ep.
Sütun geçiş yöntemleri açısından, ileri dolaşım hazırlama, verimli sıvı faz hazırlama ve daha önce bahsedilen kolon geçiş makineleri gibi otomatik analiz ekipmanlarına ek olarak, manuel kolon geçişi esas olarak üç türe ayrılır: atmosferik basınç kolonu geçişi, basınçlandırma kolon geçişi ve basınç kolonu geçmesi.
Bunlar arasında, kolon boyunca basınçsızlaştırma, elüentin hızlı akış hızı nedeniyle zayıf adsorpsiyon verimliliği ile sonuçlanır, bu da tepsilerin çoğunun ve zayıf ayırma verimliliğinin kaybına yol açar. Nispetleri nispeten açık TLC plakaları olan, özellikle üründe sadece bir büyük kutupsal safsızlığa sahip numuneler için ayırmak için uygundur; Zamanının çoğu, dikkatli bir şekilde saflaştırılmadan önce bazı safsızlıkları gidererek bileşiklerin ön tedavisi için harcanır. Kullanım sırasında negatif basıncın neden olduğu çözücü buharlaşmasının, kolonun dış yüzeyinde çok sayıda su damlacıkının yoğunlaşmasına yol açabileceğine dikkat edilmelidir. Suya duyarlı bileşikler kolayca denenmemelidir.
Atmosferik basınç sütunu geçişi, üçü arasında en etkili ayırma yöntemidir, ancak çözücü genellikle çok yavaş hareket ettiğinden, en iyi ayırma etkisi bile verimliliği etkileyebilir. Bu nedenle, basınç genellikle şu anda uygulanır, bu da basınçlı sütun geçişi olarak adlandırılır; Ancak baskı çok yüksek olmamalı. Genel olarak, manuel çalışma için çift zincirli bir top kullanılır ve otomatik çalışma için bir balık pompası kullanılır. Her ikisi de resimde gösterildiği gibi değiştirilebilir.
Geleneksel sütun geçiş işlemi:
Hazırlık çalışmaları iyi yapılmalıdır:
Bir sütun seçerken, bir zımpara tahtası olup olmadığını gözlemleyin. Tahtalar zımparalaması olmayan sütunlar için, tabanı biraz pamukla doldurmayı unutmayın. Pamuk, silikonun çıkmasını engelleyebildiği sürece çok kalın veya çok ince olmamalıdır. (Blogcu doğrudan bir kıyafet askısını söktü ve fişin üzerindeki çıkışa pamuk eklemek için kullandı)
Minimum polarite eluent, UV lambasını (laboratuvar personeli, el tipi, istediğiniz zaman fotoğraf çekmeye hazır), basınç ekipmanları ve test tüpü rafını gerektiğinde hazırlayın!
Uygun bir sütun seçin, silikon jel ekleyin, silikon jeli ıslatın ve düzleştirin
Seçimigeleneksel kolon kromatografisiçok önemlidir ve boyutları, genellikle bölünebilen ürün miktarına göre hesaplanmalıdır:
Birkaç miligram sütun (toplam sentez için son seçim);
Birkaç on miligramın bir sütunu (metodolojik genişleme substratı);
500 miligram ila 1 gram sütun (hammadde olarak metodoloji kullanılarak);
5G civarında sütunlar ve daha büyük ölçekler.
Sütun çapının laboratuvardaki yüksekliğe en yaygın oranı genellikle 1: 2.5 ve 1:15 arasındadır. Numune yüklemesi sırasında sabit bir faz olarak kullanılan silika jel miktarı, numunenin yaklaşık 20 ila 40 katıdır. Sütunları seçme standardı, numunenizin TLC plakası tırmanma durumuna dayanmalıdır. Yakınlıkta birçok safsızlık varsa, mümkün olduğunca daha büyük bir sütun seçmeye çalışın, böylece numuneniz küçük bir ince tabaka (5 mm'nin altında önerilen kalınlık) ile kaplanabilir. Eğer safsızlıklar çok uzaktaysa, bu kalınlık doğal olarak artırılabilir, ancak ürün basitçe yıkanmadıkça numunenizin kalınlığının 2 cm'yi aşması önerilmez.
Birçok insan, daha fazla silikon eklemenin, örneğim üzerinde daha kalın olsa bile, iyi ayrılabilir mi? Bu cevap olumsuz!
Bunun nedeni, bu insanların altındaki ve yukarıdaki numunelerin aynı çizgide çalışmadığını asla düşünmedikleri, bu yüzden sadece çoğu saf olanlardan, zaman ve çözücülerin boşa harcanmasından bahsetmemek için sadece çapraz olan bazı saf olanları elde edebiliyorlardı!
Bu yüzden numune inceltmeyi gerektirir!
Sütunu seçtikten sonra, bir besleme hunisinden silikon eklenebilir. Aynı zamanda, bir maske taktığınızdan ve bir duman kaputunda çalıştığınızdan emin olun. Bunun nedeni blog yazarı (silikoz) tarafından detaylandırılmayacaktır.
Silika jel infiltrasyonuna gelince, önerilen işlem: önce silika jel kolonunu silika jel ile dikey olarak yerleştirin, silika jelin yüzeyini elinizle düzleştirin, silika jel kolonunun tabanını bir su pompasına bağlayın, silika jelini pompalayın ve daha sonra en az polar elüte dökün. Eruent sızmak üzereyken, çözücünün su pompasına pompalanmasını önlemek için kapatma valfini kapatın.
Daha sonra, basınç altında, silikon jel, en az miktarda gelişmekte olan ajanla yedi veya sekiz sütun hacmini yıkayarak eşit olarak ıslatılabilir.
Yukarıdaki örnek
Örnekleme ıslak örnekleme ve kuru örneklemeye ayrılır.
(1) Islak örnekleme.
Önerilen yöntem, numuneyi emmek için kauçuk bir ucu olan bir pipet kullanmak, silikon jelin üst kısmına yakın, numuneyi bir katmanı kaplayana kadar yavaş ve eşit olarak damlamak, daha sonra numuneyi eklemeyi bırakıp yağlı maddeyi silikon jel tabakasına daldırmak için biraz basınç uygulamaktır; Yağlı maddeyi silikon tabakaya daldırın ve tüm numuneler yüklenene kadar bu işlemi birden çok kez tekrarlayın!
Bazı yeni öğrenciler, ıslak proses yağını bir kerede kaplamak yerine bu operasyonun neden gerçekleştirildiğini merak ediyor olabilirler?
Aslında, bu işlem numune tabakasının etkili yüksekliğini azaltabilir. Bu noktada, kolon kromatografisi zaten başladı ve sonraki numuneler, önceki numuneleri silika jelde adsorb ve desorb'a iten çözücüler gibidir.
(2) Kuru örneklemeye gelince.
Kesinlikle gerekli olmadıkça, önerilmez. Katı numunelerin daha fazla dövülmesi veya kristalleşmesi önerilir. "Vicdansız yöntemler, etil asetat ve su, ultrasonik salınım destekli yüksek kaynar yağın kristalleşmesi" ve "laboratuvar yeniden kristalleştirme yönteminin paylaşılması" önerilir.
Kuru örnekleme genellikle iki sorun getirir; Bir yandan, numune karıştırma işlemi sırasında, döner buharlaşma için sıcaklığı artırma ihtiyacı nedeniyle numune ve silika jel arasındaki reaksiyon olasılığı artar; Öte yandan, kuru yükleme, numune katmanına adsorbanların ekleneceği, numune tabakasının yüksekliğini veya kolonun boyutunu artırarak daha fazla zaman ve daha fazla çözücü gerektiren anlamına gelir.
Başka bir seçenek yoksa, adsorbe edilmiş tozu, ıslak yöntemlere benzer bazı gereksinimlerle yükleme için sütuna yavaşça dökün.
Susuz sodyum sülfat veya kuvars kum ekleyin
Eluent eklenmesi sırasında numune tabakasını etkilemekten kaçınmak, eşitsizliğe, deformasyona ve ayırma verimliliğini etkilemek için, susuz sodyum sülfat veya kuvars kum tabakası genellikle numune tabakasının üzerine yerleştirilir.
Mühendislerimiz şahsen susuz sodyum sülfat bırakmayı tercih ediyor, çünkü aynı zamanda bir kurutma fonksiyonuna sahiptir ve dalgalanma, ısı emilimi ve yoğunlaşmaya eğilimli diklorometan gibi çözücüler için dostudur!
Gradyan elüsyonu, örnekleme ve toplama
Yüklendikten sonra, önce 2-3 sütun hacimleri (bir sütun hacmi, içeri ve dışarı akan mobil fazın hacmi olarak tanımlanır) ve daha sonra elüsyon için bir oran seçin.
Kolondan geçen eluent nasıl seçilir?
Eruent'in oranı, ürününüz TLC plakasında yaklaşık 0.
Bu, birçok kitap okuduğum ve paylaştığım sütun yıkama deneyimidir ve gerçek süreç de çok benzerdir. Şahsen, gradyanı iki kez azaltmayı tercih ederim.
Örneğin, TLC plakası tırmanışı için çözücü PE/EA =2: 1 ise, blogcunun PE/EA =4: 1'den gradyan elüsyonunu başlatma olasılığı daha yüksektir ve PE/EA =2: 1'de biter, genellikle daha iyi sonuçlara neden olur.
Zarif toplarken teknikler de vardır. Önce almak için daha büyük bir test tüpü seçebilirsiniz ve TLC hedef noktaya yaklaştığında daha küçük bir test tüpüne geçin. Bu, daha fazla alma olasılığını azaltabilir ve safsızlıklardan kaçınabilir.
Safsızlık noktalarının ve ürün noktalarının birbirine yakın olduğu durumlarla, özellikle de zayıf floresan olanlar ile karşılaşırsanız, basınç uygulamamayı unutmayın. Bunun yerine, kolonu normal basınç altında geçirmeyi seçin ve her yarım veya daha az tüp bağlandığında tüpü değiştirin, bu da saflaştırma olasılığını da artırabilir.
Sütunu zamanında ele almamayı unutmayın!
Birçok insan, daha sonraki aşamada TLC'den sonra bir veya iki tüpte ürün olmadığında sütunun geçtiğini ve kurutulduğunu varsayma alışkanlığına sahiptir.
Sadece hesapladığımda verimin çok düşük olduğunu veya bir spektrum yapmaya gittiğimde, spektrumun yanlış olduğunu ve yanlış noktayı kaçırdığını fark ettim. Derinden pişman oldum.
Bu nedenle, istenen noktayı tamamladıktan sonra sütunu işlemek için acele etmemeniz önerilir. Bunun yerine, işlemeden önce verimle eşleşecek nükleer manyetik rezonans yapın.
Eğer meşgulseniz veya bununla diğer bileşikleri arındırmak için acele ediyorsanızgeleneksel kolon kromatografisi, yüksek polarite iyi huylu karışık çözücü ile durulanması ve tanımlama sonuçları için elüentin bu kısmını ayrı ayrı bırakmanız önerilir.
Popüler Etiketler: Geleneksel Sütun Kromatografisi, Çin Geleneksel Sütun Kromatografisi Üreticileri, Tedarikçiler, Fabrika
Bir çift
Küçük kromatografi sütunuSonraki
Klasik kolon kromatografisiSoruşturma göndermek
