Klasik kolon kromatografisi

Klasik kolon kromatografisi, sıvı-katı kromatografi olarak da bilinen, çözünen maddeleri sabit bir faz (genellikle katı bir adsorban) ve bir mobil faz (çözücü) arasındaki dağılım farkına dayalı olarak ayırmak için bir tekniktir . Temel prensip aşağıdaki gibi özetlenebilir: sabit fazın yardımıyla, çözeltinin çözülmesi ile birlikte, çözeltinin, kullanıldığı için, arındırılır. Sabit faz ile mobil faz arasındaki dağılım katsayıları .

Kolon kromatografisinde, sabit faz genellikle büyük bir spesifik yüzey alanına ve adsorpsiyon merkezine sahip olan ve çözünen moleküller, van der waals zorlukları ve diğer etkileşimler ile hidrojen bağları oluşturabilir, van der waals zorlukları ve diğer etkileşimler için hidrojen bağları oluşturabilir ({0}} .), adsorpsiyonu oluşturur, sonuçlandırılır. Sabit fazdan moleküller ve seçimi, çözünen maddenin polaritesine ve adsorbanın adsorpsiyon özelliklerine göre belirlenmelidir .

Ayırma işleminde, karışım çözeltisi, mobil fazın akışı ile sabit fazı . içeren kolona sokulur, bileşenler sabit faz ., daha polar bileşenlerin sabit faz tarafından daha kolay olduğu için genellikle kolaydır, bu nedenle, daha fazla kutsal bileşenler genellikle kolaydır, bu nedenle, bu nedenle, genellikle kolaydır, bu nedenle, bu nedenle, bu nedenle, genellikle 2, bu nedenle, genellikle hareket etmek, bu nedenle, bu nedenle, genellikle hareket ettirilir, bu nedenle, bu nedenle, bu nedenle, genellikle hareket etmek için genellikle kolaydır, bu nedenle, bu nedenle, bu nedenle, bu nedenle, genellikle hareket etmek için genellikle kolaydır. Zayıf polarite mobil faz tarafından kolayca taşınır ve hareket hızı daha hızlı . Bu şekilde, her bileşen . ayrımı elde etmek için sütuna bir dizi renk bandı oluşturur.

► Türev tedavisinin amacı
Türevin temel amacı, analitlerin fizikokimyasal özelliklerini değiştirmektir, böylece . sütun kromatografisi tarafından ayrılma ve tespit için daha uygun olmalarıdır. Türev işleme aşağıdaki hedeflere ulaşabilir:

1) Geliştirilmiş algılama performansı: Tespit edilmesi kolay fonksiyonel gruplar ekleyerek, analit dedektörde daha güçlü bir sinyal oluşturur ve tespitin duyarlılığını ve doğruluğunu iyileştirir .
2) Moleküler yapıyı veya polariteyi değiştirin: Kolondaki ayrılmasını iyileştirmek ve pik sonucunu azaltmak için analitin polaritesini ayarlayın . .
3) Artan Volatilite: Bazı uçucu olmayan analitler için, türevlendirme oynaklıklarını artırabilir, bu da gaz kromatografisinde ayrılmalarını ve tespit etmelerini sağlayabilir .
4) Kararlı Analit: Analitteki hassas fonksiyonel gruplar, ayrılma ve tespit sırasında bozulmayı veya değişimi önlemek için türevlendirme ile korunabilir .

► Türev tedavisinin türü
Türevizasyon esas olarak iki türe ayrılır: kolon öncesi türevlendirme ve sütun sonrası türevlendirme:

1) Kolon öncesi türev:
Analit sütuna girmeden önce, . türevlerini üretmek için türevlerle kimyasal olarak tepki verir.
Türevler daha sonra ayrılır ve . bir sütunda tespit edilir.
Prekolonun türevlendirmesi, serbest reaksiyon koşulları ve kolay çok aşamalı reaksiyonun avantajlarına sahiptir, ancak safsızlıklar getirebilir veya . örneklerini de kaybedebilir.
2) Sütun türetimi sonrası:
Analitler önce kromatografik kolonda ayrılır ve daha sonra türev hücresindeki türevlerle kimyasal olarak reaksiyona girer .
Ortaya çıkan türevler daha sonra algılama için dedektöre girilir .

Sütun sonrası türetme, iyi tekrarlanabilirlik ve daha az etkileyici faktörlerin avantajlarına sahiptir, ancak ek aletler ve ekipman gerektirir .
► Türev işlemenin uygulama örnekleri
Doğal farmasötik kimyasal bileşenlerin ekstraksiyonu ve ayrılmasında, türev işleme teknolojisi ile birleştiğinde aşağıdaki uygulamaları elde edebilir:

1) Geliştirilmiş tespit duyarlılığı: örneğin, amino asit analizinde, kolon öncesi türevlendirme yoluyla kolayca saptanabilir fonksiyonel grupların (floroforlar gibi) sokulması, dedektör üzerindeki amino asitlerin sinyal gücünü artırabilir, böylece tespitin duyarlılığını artırabilir .
2) Ayrılma etkisini geliştirin: Benzer polariteye veya benzer yapıya sahip bazı bileşikler için polarite, türevlendirme tedavisi ile ayarlanabilir, böylece kromatografik kolon üzerindeki ayrım etkisi ., flavonoidlerin analizinde, farklı fonksiyonlar tedavisi ile ayarlanabilir, böylece farklı işlevsel gruplar, polaritasyon etkisi ile eklenebilir ve bu şekilde, polaritasyon etkisi ile eklenebilir ve {ayrım yapılabilir, bu nedenle polaritasyon ve iyileştirme ile 2), bu nedenle polaritasyon etkisi ile eklenebilir ve bu şekilde, polanitalleşme ve iyileştirme ile {{ayrıştırma yapılabilir, bu nedenle polaritasyon ve iyileştirme ile eklenebilir ve bu şekilde polaritasyon ile eklenebilir ve {{{
3) Hassas fonksiyonel grupların korunması: hassas fonksiyonel gruplar (fenolik hidroksil, amino, vb. Gibi .) içeren analitler için, türevlendirme, bu fonksiyonel grupları ayrılma ve tespit sırasında bozulma veya değişimden koruyabilir. Ayırma .